超螺旋 pBR322 DNA

超螺旋質粒 pBR322 DNA 是通過大規(guī)模堿裂解法（Sambrook等人，1989 年）1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros等人，1984 年）2中產生的。

負超螺旋 pBR322 DNA 被進一步處理，使 DNA 更超螺旋，并且具有較窄的連接數(shù)范圍，使其成為松弛反應的理想底物。

正超螺旋質粒 pBR322 DNA 是通過在最終純化前用反向旋轉酶處理松弛的 pBR322 產生的。

它以 1mg/ml 的 TE（10mM Tris-HCl (pH 7.5)，1mM EDTA）濃度在干冰上運輸。儲存于 4 o C

松弛的 pBR322 DNA

松弛質粒 pBR322 DNA 是通過大規(guī)模堿解法（Sambrook 等人，1989） 1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros 等人，1984）2 產生的，然后使用拓撲異構酶松弛得到的超螺旋質粒I. 進一步純化和優(yōu)化拓撲異構酶測定

它以 1mg/ml 的 TE（10mM Tris-HCl (pH 7.5)，1mM EDTA）濃度在干冰上運輸。儲存于 4 o C

將 0.5 µg 松弛的 pBR322 與 1 U DNA 促旋酶在 30 µl 的反應體積中在 37 o C 的孵育緩沖液中孵育 30 分鐘后*轉化為超螺旋形式。

線性 pBR322 DNA

線性質粒 pBR322 DNA 是通過大規(guī)模堿解法（Sambrook 等人，1989 年） 1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros 等人，1984 年）2產生的。

通過與 EcoRI 孵育使其線性化，并在 TE（10 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA）中進一步濃縮和純化至終濃度為 1 mg/ml。儲存于 4 o C

它是用干冰運輸?shù)摹?nbsp;